非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)品簡介
非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)會引起非洲豬瘟等急性、出血性、烈性傳染病。

產(chǎn)品型號：

更新時(shí)間：2025-07-08

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：866

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

科研試劑盒

ELISA試劑盒 PCR試劑盒生化試劑盒

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非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

商品名稱：非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

Name ：African Swine Fever Virus(ASFV) Probe PCR Kit

非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)會引起非洲豬瘟等急性、出血性、烈性傳染病，其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達(dá)100%，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達(dá)40~42℃），心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)、腎、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測確診，對養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p害，因此快速檢測非洲豬瘟病毒具有重要意義。熒光定量PCR是檢測傳染性疾病的主流技術(shù)，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1.即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。

3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高，引物是根據(jù)非洲豬瘟病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。

6.本產(chǎn)品只能用于科研。

【試劑組成】

成分	十孔盒包裝
2×Probe qPCR MagicMix	0.5 mL（本色蓋）
熒光PCR專用模板稀釋液	1 mL（黃蓋）
非洲豬瘟病毒PCR引物	100 μL（白蓋）
非洲豬瘟病毒qPCR探針	100 μL（棕色管）
非洲豬瘟病毒陽性對照2.0 (1×10E8拷貝/μL)	50 μL（紅蓋）
核酸釋釋劑試用裝	50次（2.5mL）
使用手冊	1份

【儲存條件及有效期】

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。

【自備試劑】樣品 DNA。

【使用方法】

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

3. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

7. 如果有N個(gè)樣品，最好設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?span>10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA/提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。

在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽

10. 性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：

成分	樣品管 N+2個(gè)	PCR陰性對照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各10 μL
非洲豬瘟病毒 qPCR探針	2 μL	2 μL	各2 μL
非洲豬瘟病毒 PCR引物混合液	2 μL	2 μL	各2 μL
待測樣品DNA模板	6 μL	不加	不加
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（2-7號）	不加	不加	各6μL（2號樣到2號管，3號樣到3號管…）

11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	94℃	5 min
PCR反應(yīng) （40個(gè)循環(huán)）	94℃	0.5 min
	55℃	0.5 min（采集FAM通道的熒光信號）
	72℃	0.5 min
最后延伸	72℃	10 min

四、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽性。