人食管平滑肌細胞

產品簡介
人食管平滑肌細胞食管是咽和胃之間的消化管，哺乳動物的食管結構上由內向外分四層:黏膜層、黏膜下層、肌層、外膜。食管平滑肌集中在肌層，僅在食管的下 2/3段存在，其中中段的 1/3位骨骼肌和平滑肌混合組成，下 1/3段全部為平滑肌，而上段 1/3
全部為骨骼肌。

產品型號：復蘇/凍存

更新時間：2025-06-29

廠商性質：生產廠家

訪問量：714

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科研細胞

細胞系原代細胞

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原代細胞培養(yǎng)的主要注意事項

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人食管平滑肌細胞

產品名稱：人食管平滑肌細胞

產品貨號：YLK-XB0539h

組織來源：食管組織

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

細胞簡介：

食管平滑肌細胞分離自食管組織。食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內，胸段通過膈孔與腹腔內腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動物的食管結構上由內向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。

其中，肌纖維的排列方式分為內環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動是由食管平滑肌收縮嚴格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱為食管上括約肌。位于食管下端，一部分在膈上，穿過膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱為食管下括約肌。

食管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中。2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏。胞密度低時，常交織成網狀。密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。

細胞特性
1)細胞來源于人正常食管組織。
2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于 90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：長梭狀細胞，貼壁培養(yǎng)。

質量檢測

優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

培養(yǎng) 基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài) ：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右。3代以內狀態(tài)最佳

傳代比例：1:2

消化液：0. 25% 胰蛋白/酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95% 。C O2，5%

該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。

2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。

3. 細胞收貨脫落

1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。

2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。

3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內。

4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。

5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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