人內(nèi)皮素-1（ET-1）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

 檢測范圍：

8pg/ml-200pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素-1（ET-1）含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人內(nèi)皮素-1（ET-1）水平。用純化的人內(nèi)皮素-1（ET-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素-1（ET-1），再與HRP 標(biāo)記的內(nèi)皮素-1（ET-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素-1（ET-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人內(nèi)皮素-1（ET-1）濃度。

試劑盒組成

標(biāo)本要求

1.      標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.  不能檢測含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：2-8℃。

2.有效期：6 個月